Xét nghiệm miễn dịch IL-Ib dựa trên nguyên lý “sandwich” hóa phát – quang miễn dịch nhằm mục đích tìm nồng độ IL-Ib trong huyết thanh và huyết tương người.
Bệnh phẩm
Mẫu bệnh phẩm là huyết thanh hoặc huyết tương không tiêu huyết
Việc lấy mẫu được thực hiện theo đúng hướng dẫn và đúng ống đựng mẫu, không rò rỉ hoặc thấm ra ngoài
Những mẫu cần pha loãng phải được pha với dung dịch đệm rửa
Nếu mẫu không được xét nghiệm ngay, cần phải bảo quản ở -200C từng phần nhỏ, tránh rã đông nhiều lần
Tiến hành kỹ thuật
Độ nhạy của máy là 1. 6 pg/ml. với độ nhạy này thì nồng độ thấp nhất cho phép là ≤ 20% cho 20 lần lặp lại.
Khoảng phát hiện của phép thử: 0-250 pg/ml. Tuy nhiên có thể thay đổi tùy vào lô chất hiệu chuẩn
Ngoại kiểm tra: Lặp lại 20 lần cho một mẫu bệnh phẩm ở 3 mức nồng độ khác nhau (n=20).
| Nồng độ (pg/ml) | Level 1 | Level 2 | Level 3 |
| Mean conc | 10. 6 | 139 | 406 |
| % CV | 8. 2 | 6. 3 | 6. 7 |
Nội kiểm tra chất lượng: Lặp lại 2 lần cho một mẫu bệnh phẩm ở 3 mức nồng độ khác nhau cho 10 xét nghiệm khác nhau (n=20)
| Nồng độ (pg/ml) | Level 1 | Level 2 | Level 3 |
| Mean conc | 3. 9 | 50. 3 | 142 |
| % CV | 13. 1 | 7. 3 | 7 |
Các bước thực hiện:
+ Hút 200 ul dung dịch pha loãng vào mỗi giếng
+ Hút 100 ul dung dịch chuẩn, mẫu và chứng vào các giếng thích hợp
+ Hòa trộn dung dịch bằng cách gõ nhẹ vào các cạnh của đĩa
+ Đặt đĩa vào đế ủ lắc nhiệt. Ủ ở 370C trong vòng 1 giờ và lắc 370 vòng/phút
+ Lấy khay chứa khỏi máy lắc. Loại bỏ dịch thừa
+ Rửa nhanh 2 lần với dung dịch đệm rửa khoảng 350 ul cho mỗi giếng, tránh nhiễm chéo giữa các giếng và dùng giấy thấm để thấm khô sau khi rửa
+ Hút 300 ul dung dịch conjugate vào mỗi giếng
+ Gõ nhẹ vào các cạnh của khay chứa để hòa trộn dung dịch
+ Đặt khay vào máy lắc nhiệt, Ủ trong vòng 1 giờ ở 370C với tốc độ lắc 370 vòng/ phút
+ Sau đó, lấy khay ra khỏi máy lắc và loại bỏ dịch thừa
+ Lập lại rửa 2 lần như trên
+ Sau khi rửa, làm đầy giếng với dung dịch đệm rửa và để cho thấm không quá 30 phút trước khi chụp hình
NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
IL-1β được chứng minh ngăn cản việc tiết insulin và giảm hàm lượng insulin và glucagons do đó đóng vai trò quan trọng trong phát triển bệnh tiểu đường type I.
22
NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ
- Đây là phương pháp dùng trong nghiên cứu, không dùng trong chẩn đoán
- Phương pháp điều tra dấu chứng Interleukin IA chỉ sử dụng trong phân tích mẫu huyết thanh và huyết tương người. Do đó những phân tích trên chất khác sẽ cho kết quả không chính xác (ví dụ như lỗi kỹ thuật hay lỗi phương pháp)
- Ảnh hưởng của Bilirubin, Hemoglobin, Triglycerides và Lipids gây nhiễu nồng độ IL-Iα và là nguyên nhân tăng hay giảm đường biểu diễn nồng độ trên biểu đồ.